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复杂基质中低丰度蛋白质的准确定量分析一直是蛋白质研究的重点和难点.随着质谱技术的飞速发展,同位素稀释质谱法成为血清中低丰度蛋白质准确定量分析的重要方法.本研究以同位素标记的人生长激素为内标,通过C12和C4色谱柱两次分离收集目标馏分,建立了基于离线二维高效液相色谱分离血清样本的新方法.然后,结合高效液相色谱-同位素稀释质谱法,准确定量了人血清低丰度蛋白质生长激素的含量.通过对模拟样品(空白血清添加已知质量生长激素标准物质,理论含量为12.00 ng/g)和国际比对样品中生长激素(浓度未知)的测量及不确定度计算,定量结果分别为(11.45±2.33)ng/g和(12.84±1.46)ng/g.该方法准确性高、重复性好,为复杂基质低丰度蛋白质的准确定量分析提供了一种有效的测量方法和可溯源的分析结果.