【摘 要】
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目的 探讨miR-641在肺腺癌中的表达情况及其分子生物学作用机制.方法 收集延安大学附属医院胸外科2018-01-01-2019-03-31行手术切除的30例肺腺癌患者癌组织及对应周围正常肺组织标本,采用qPCR法检测肺腺癌组织和肺腺癌细胞系A549、H1299和H157中miR-641表达水平,分析miR-641表达与肺腺癌患者临床特征关系.MTT法检测miR-641对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭及迁移实验检测miR-641对肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响;靶基因双
【机 构】
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延安大学附属医院胸外科,陕西 延安 716000
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目的 探讨miR-641在肺腺癌中的表达情况及其分子生物学作用机制.方法 收集延安大学附属医院胸外科2018-01-01-2019-03-31行手术切除的30例肺腺癌患者癌组织及对应周围正常肺组织标本,采用qPCR法检测肺腺癌组织和肺腺癌细胞系A549、H1299和H157中miR-641表达水平,分析miR-641表达与肺腺癌患者临床特征关系.MTT法检测miR-641对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭及迁移实验检测miR-641对肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响;靶基因双荧光素酶实验检测miR-641与CYR61的相互作用;PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中CYR61表达.结果 qPCR法检测miR-641在肺腺癌组织、肺组织、A549、H1299、H157和WI-38细胞中表达值分别为0.14±0.02、1.01±0.08、0.35±0.04、0.47±0.05、0.48±0.04、0.98±0.08,F=775.537,P<0.001;肺腺癌组织和肺组织miR-641表达差异有统计学意义,t=57.786,P<0.001.miR-641表达与TNM分期(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.013)有关联.NC组和miR-641 mimics组A549细胞增殖活力分别为0.98±0.07和8.23±0.53,t=23.489,P<0.001.miR-641 mimics转染A549细胞24、48和72 h后,细胞增殖活力分别为1.23±0.19、1.86±0.21和3.05±0.29,F=333.197,P<0.001.Transwell侵袭及迁移实验结果显示,与NC组(101.42±10.14)％和(97.24±7.63)％相比,miR-641 mimics组迁移及侵袭力分别为(71.43±6.12)％和(63.47±7.12)％,t值分别为13.620和12.430,均P<0.001.Target Sacn生物信息网站预测miR-641基因序列与CYR61基因序列存在结合片段,靶基因双荧光素酶实验显示,野生型CYR613\'-UTR相对双荧光素酶活性低于突变型CYR613\'-UTR,F=49.832,P<0.001.NC组和miR-641 mimics组CYR61蛋白表达水平分别为1.00±0.09和0.61±0.10,t=5.024,P=0.004.MTT增殖实验显示,与miR-641 mimics相比较,miR-641 mimics+pSUPER-CYR61转染A549细胞24、48和72 h后细胞增殖活性增加,分别为1.61±0.15、2.29±0.23和3.46±0.34,F=356.301,P<0.001.Transwell迁移实验表明,NC组、miR-641 mimics组和miR-641 mimics+pSUPER-CYR61组A549细胞迁移力分别为(100.00±7.23)％、(45.61±5.67)％和(97.12±3.17)％,F=53.994,P<0.001;Transwell侵袭实验表明,NC组、miR-641 mimics组和miR-641 mimics+pSU-PER-CYR61组A549细胞侵袭力分别为(100.00±7.82)％、(39.42±6.07)％和(85.62±5.37)％,F=34.893,P<0.001.结论 miR-641在肺腺癌组织和细胞中处于低表达状态,可抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调节CYR61有关,可成为肺癌基因治疗的潜在靶点.
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