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本发明涉及一种检测技术领域的烟草中生物碱的检测方法，包括如下步骤：步骤一，取烟草样品，加入碱溶液，超声处理，之后加入含有喹啉的有机溶剂，震荡萃取，将有机层浓缩，得进样溶液；步骤二，利用气相色谱．质谱联用仪检测进样溶液，对烟草中生物碱进行定性和定量测定。本发明的检测方法步骤简单，操作方便；同时重现性较好，灵敏度较高；本发明的检测方法回收率较高，同时能确保烟叶生物碱各个组分提取完全，可有效应用于烟草生物碱的分析检测。