脐血间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuxin99
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目的 评价将人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)来源的类雪旺细胞(Schwann cells,SCs)作为种子细胞,修复大鼠坐骨神经15 mm缺损的效果,为hUCBMSCs应用于临床治疗周围神经缺损提供实验依据.方法 SPF级3月龄雄性SD大鼠45只,体重200 ~ 250 g.取新生儿脐带血,淋巴细胞分离液复合高分子量羟乙基淀粉分离培养hUCBMSCs并鉴定;取第3代hUCBMSCs,采用改良化学诱导法联合细胞因子方法诱导分化培养类SCs并鉴定.取15只SD大鼠坐骨神经,采用液氮反复冻融振荡洗涤法制备去细胞神经基膜管作为支架材料;将密度1×107个/mL的类SCs细胞悬液多点注射至该支架内复合培养7d构建组织工程神经.取SD大鼠30只制备长约15 mm坐骨神经缺损动物模型,根据缺损神经修复方法不同,实验分为A、B、C3组(n=10),A组采用组织工程神经缝合,B组采用未复合类SCs的去细胞神经基膜管缝合,C组采用自体坐骨神经原位缝合.术后行大体观察、坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)测定、神经电生理功能检测、腓肠肌湿重测定、Masson染色评价神经修复情况.结果 分离培养的hUCBMSCs高表达MSCs表面标志;诱导培养后类SCs经免疫细胞化学染色检测示神经胶质细胞标志物S100b、胶质纤维酸性蛋白、P75表达呈阳性.术后8周,大体观察示A组组织工程神经管壁无坏死及液化,周围轻度粘连,吻合处连续性较好;B组支架外观与A组相似;C组自体神经周围粘连较A、B组轻,吻合口光滑,无明显膨大,颜色与正常神经相似.各组大鼠术后SFI随时间延长呈逐渐降低趋势,C组SFI恢复优于A、B组,A组优于B组(P<0.05).术后各组大鼠远端吻合口处均可检测到神经复合动作电位,波幅及传导速度C组均优于A、B组,A组优于B组(P<0.05).术后各组大鼠实验侧小腿腓肠肌与健侧相比,均发生不同程度萎缩;腓肠肌湿重恢复率C组优于A、B组,A组优于B组(P<0.05).Masson染色示A组可见大量再生神经纤维,有髓神经纤维排列较为整齐、致密,纤维直径相似;C组有髓神经纤维密度、直径及髓鞘厚度和轴突直径均明显多于A、B组,A组多于B组(P<0.05).结论 hUCBMSCs来源的类SCs能够促进大鼠15 mm坐骨神经损伤修复可作为组织工程神经种子细胞来源.
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