【摘 要】
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本研究以牛分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增esat6和cfp10基因,构建重组表达载体pET-32a（＋）-esat6和pET-32a（＋）-cfp10,并通过原核表达系统分别表达重组esat6和cfp10蛋白,经Ni-NTA
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心,中国兽医药品监察所
【基金项目】
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“十三五”国家重点研发计划项目“牛羊重要疫病诊断与检测新技术研究”（2016YFD0500900）,现代农业（奶牛）产业技术体系科学家岗位项目（CARS-36）,山东省自然科学基金三院联合项目“牛型分枝杆菌ESAT6和CFP10调控巨噬细胞炎性反应的功能研究”（ZR2015YL069）,山东省农业科学院农业科技创新工程项目“主要畜禽疫病监测和预警”（CXGC2016A10）
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本研究以牛分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增esat6和cfp10基因,构建重组表达载体pET-32a（＋）-esat6和pET-32a（＋）-cfp10,并通过原核表达系统分别表达重组esat6和cfp10蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化后,对目的蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot验证,BCA法测定目的蛋白浓度,最后将east6和cfp10蛋白混合后用于牛结核病临床检测,并对检测数据进行分析.结果表明,牛分枝杆菌es-at6和cfp10蛋白在大肠杆菌系统中获得高效表达;其混合蛋白
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