【摘 要】
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目的:研究ETV4转录因子各保守结构在转录调节结直肠癌细胞增殖以及迁移过程中的作用以及机制。方法:利用PCR介导的克隆技术,在前期构建的ETV4载体基础上,构建含不同ETV4结构
【机 构】
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重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;
【基金项目】
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国家自然科学基资助项目(编号:81401951);重庆市科委自然科学基金资助项目(编号:cstc2016jcyj A0227)
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目的:研究ETV4转录因子各保守结构在转录调节结直肠癌细胞增殖以及迁移过程中的作用以及机制。方法:利用PCR介导的克隆技术,在前期构建的ETV4载体基础上,构建含不同ETV4结构域的蛋白截短体ETV4(1~339)(包含酸性结构域)与ETV4(340~484)(含DNA结合结构域)。利用CCK-8试剂盒检测不同截短体对结直肠癌细胞增殖的影响,利用细胞划痕实验检测不同截短体对结直肠癌细胞迁移的影响。进一步利用定量PCR技术检测表达不同截短体过表达细胞中上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物的变化情况。结果:CCK-8实验结果显示截短体ETV4(1~339)无明显促进结直肠癌细胞增殖的作用,而截短体ETV4(340~484)和全长蛋白都可明显促进结直肠癌细胞增殖(P<0.01)。细胞划痕实验显示截短体ETV4(340~484)和全长蛋白可促进结直肠癌细胞迁移而截短体ETV4(1~339)却无此作用。进一步对EMT标志物检测发现ETV4(340~484)和全长蛋白可导致E-cadherin表达下降,N-cadherin、Vimentin和Twist表达上调(P<0.01),而ETV4(1~339)中EMT标志物无明显变化。结论:本实验首次证明,ETV4促进结直肠癌细胞增殖和迁移主要是通过ETV4中的ETS结构域起作用,并且可能通过介导EMT标志物来调控结直肠癌细胞转移。
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