TAGLN真核表达载体pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAG-LN-mut及稳定转染细胞株的构建

• 作 者: 方媛媛 苏红 周慧敏 林莹
• 机 构: 林瑾中山大学孙选仙纪念医院消化内科,中山大学孙逸仙纪念医院恶性肿瘤基因调控与靶向治疗广东普通高校重点实验室
• 出 处: 世界华人消化杂志
• 发表日期: 2012年25期
• 关键词: TRANSGELIN 结肠癌 人结肠癌细胞RKO Gateway克隆技术 Transgelin Colon carcinoma RKO cellsGateway
• 基金项目: 国家自然科学基金青年科学基金资助项目,No.30901782中央高校基本科研业务费专项基金资助项目,Nollykpy32

目的：构建携tagln基因的真核表达载体,建立稳定转染该质粒的人结肠癌细胞株RKO并鉴定.方法：通过Gateway克隆技术,使用pOTB7-TAGLN-mut与pDONR221进行BP重组反应产生入门克隆,再与pcDNA6.2/EmGFP-BsdV5-DEST空载体进行LR重组反应,生成目的质粒pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAGLN-mut通过测序验证目的质粒的插入序列.将携带tagln的真核表达载体和对照质粒稳定转染至人结肠癌细胞株RKO.通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测tagln的