【摘 要】
：
目的研制基因工程胰高血糖素.方法利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序.检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intei
【机 构】
：
吉林大学药学院生物制药系,长春,130021吉林大学基础医学院生物化学和分子生物学系;长春市第二医院;长春市中心医院;加拿大McMaster大学生化系;
论文部分内容阅读
目的研制基因工程胰高血糖素.方法利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序.检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件.利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素.SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行N-末端测序.结果 DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L.结论获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产.
其他文献
编者按:“十一五”以来,哈尔滨市把增强自主创新能力作为发展科学技术的战略基点和调整产业结构、转变经济发展方式的中心环节,以深化科技管理体制机制改革为突破口,不断完善
目的：研究Mcl?1对肺癌细胞PC?9增殖和凋亡的影响。方法利用Western印迹检测人正常肺上皮细胞及4种肺癌细胞株中Mcl?1的表达； CCK8细胞增殖实验、平板克隆形成实验观察Mcl?1表达
随着我国计算机领域的发展,我国电脑软件以及硬件的发展速度不断提高,从而为我国三维动画技术应用于影视动画中提供了基础条件.三维动画技术的使用不仅打破了动画只存在于纸
目的 探讨心理干预对改善脊柱侧弯患者焦虑心理的作用.方法 将5000例脊拄侧弯患者随机分为对照组和观察组各2500例,对照组给予常规护理,观察组除常规护理外,同时给予心理干预
四十余年风雨如磐，四十余年星火燎原。中国人民解放军第二炮兵自成立之日起，就被我国军方视为掌握核心军事技术的战略导弹部队，肩负起捍卫共和国安宁的神圣使命。作为服务于这支