异常凝血酶DCP基因克隆表达、纯化及单克隆抗体制备与鉴定

• 作 者: 沈鹏 司进 李琦雯 渠利利 李璐蓉 严晓璐 季国忠
• 机 构: 南京医科大学第二附属医院消化医学中心南京医科大学消化内镜研究所,南京医科大学第二附属医院检验科
• 出 处: 世界华人消化杂志
• 发表日期: 2013年35期
• 关键词: 异常凝血酶原 原核表达 杂交瘤技术 单克隆抗体 肝细胞肝癌 肿瘤标志物 Des-T-carboxy prothrombin Mono-clonal antibo

目的：通过克隆、表达一种有前景的肝癌肿瘤标志物人去羟基凝血素（Des-γ-carboxyprothrombin，DCP），制备抗DCP单克隆抗体并初步鉴定其特性．方法：依据DCP基因序列，合成DCP全长基因，构建原核表达载体pColdⅡ—DCP，转化至Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，vZZNi^2＋孙亲和层析柱纯化带有His标签的DCP蛋白．纯化的蛋白免疫Balb／c小鼠，制备抗DCP单克隆抗体，以ELISA法检测抗体效价与亚型；Westernblot和免疫组织化学