【摘 要】
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牛A群轮状病毒(BRVA)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛诺瓦病毒(BNoV)和牛纽布病毒(BNeV)是引起犊牛腹泻的常见病毒,且临床上多存在混合感染的情况.本试验的目的 是建立可以同时检测上述5种病毒的多重PCR方法.通过设计引物,优化反应体系和条件,成功建立了可同时检测BRVA、BCoV、BVDV、BNoV和BNeV的多重PCR方法.该方法只特异性检出目标病毒,而对牛星状病毒、牛嵴病毒、牛细小病毒、产肠毒素大肠杆菌、沙门菌和空肠弯曲杆菌等腹泻病原均无扩增,具有良好的特异性和稳
【机 构】
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西南民族大学畜牧兽医学院,成都610041;西南民族大学畜牧兽医学院,成都610041;青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,成都610041
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牛A群轮状病毒(BRVA)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛诺瓦病毒(BNoV)和牛纽布病毒(BNeV)是引起犊牛腹泻的常见病毒,且临床上多存在混合感染的情况.本试验的目的 是建立可以同时检测上述5种病毒的多重PCR方法.通过设计引物,优化反应体系和条件,成功建立了可同时检测BRVA、BCoV、BVDV、BNoV和BNeV的多重PCR方法.该方法只特异性检出目标病毒,而对牛星状病毒、牛嵴病毒、牛细小病毒、产肠毒素大肠杆菌、沙门菌和空肠弯曲杆菌等腹泻病原均无扩增,具有良好的特异性和稳定性.对BRVA、BCoV、BVDV、BNoV、BNeV的最低检测下限分别为1.63×105、2.0×106、1.9×105、1.96×105和2.0×105 copies·μL-1.比较试验表明,该多重RT-PCR方法与检测单一病毒的RT-PCR方法的符合率为100％.利用该方法对2019-2020年采集自川西北草原的220份牦牛腹泻样本的检测结果表明,BRV的检出率为40.5％、BNoV的检出率为5.9％、BNeV的检出率为4.5％,而BVDV和BCoV无检出.本研究建立的多重RT-PCR方法可同时检测犊牛腹泻粪便样品中的5种常见腹泻病毒,为牛腹泻的快速诊断提供了技术支持.
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