曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

• 作 者: 李丽娟 陈伟 许辉 万拮 李若瑜 刘伟
• 机 构: 100034,北京大学第一医院皮肤性病科真菌室,北京大学真菌和真菌病研究中心,100034,北京大学第一医院皮肤性病科真菌室,北京大学真菌和真菌病研究中心,100034,北京大学第一医院皮肤性病科真菌
• 出 处: 中华皮肤科杂志
• 发表日期: 2011年44期
• 关键词: 曲霉菌属 生物膜 微生物敏感性试验 抗药性 真菌

目的 探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制.方法 利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性;同时建立22株曲霉生物膜的体外模型,用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐(XTT)减低法来评价曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性.通过实时RT-PCR测定烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因的相对表达量.结果 对于曲霉的游离孢子,两性霉素B的最低抑菌浓度(MIC)范围是0.5～2 mg/L,卡泊芬净的最低有效浓度(MEC)范围是0.125～0.25 mg/L,伏立康唑的MIC范围是0.5～1 mg/L;对于曲霉生物膜,两性霉素B的SMIC50(抑制50%同着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度)和SMIC80(抑制80%固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度)范围分别是2～32 mg/L和8～>32 mg/L,卡泊芬净的SMIC50和SMIC80范围分别是32～>256 mg/L和256～>256 mg/L,伏立康唑的SMIC50和SMIC80范围分别是4～>256 mg/L和32～>256 mg/L.烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因相对表达量测定显示,与0 h相比,7个待测基因在4 h时表达量没有变化;8 h时AfuMDR1、CYP51A、CYP51B表达量升高,CYP51A表达量升高最明显;12、16、24 h时MuMDR1、MuMDR2、MuMDR4、CYP51A、CYP51B表达量升高,其中CYP51A表达量升高的最明显;MuMDR3和atrF在生物膜形成过程中表达量没有明显变化.结论 与游离孢子相比,曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性明显下降;烟曲霉形成生物膜以后,药物外排泵基因和唑类靶酶基因的表达量升高。