【摘 要】
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目的:探究人参皂苷CK(CK)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的迁移和胶原沉积的作用以及相关的机制.方法:以体外培养的大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB为诱导剂,CK为干预剂.实验分为三组(每组每次实验有5个负孔,独立重复3次即每组n=3):采用CCK-8法检测对照组(不做处理)、模型组(给予PDGF-BB 20 mg/L)、干预组(同时给予PDGF-BB 20 mg/L+CK 5μmol/L)细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移;实时荧光定量PCR检
【机 构】
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646000 四川省泸州市,西南医科大学附属医院 儿科 四川省出生缺陷临床医学研究中心;四川大学 华西第二医院 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室;四川大学 华西第二医院 出生缺陷与相关妇儿疾病教
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目的:探究人参皂苷CK(CK)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的迁移和胶原沉积的作用以及相关的机制.方法:以体外培养的大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB为诱导剂,CK为干预剂.实验分为三组(每组每次实验有5个负孔,独立重复3次即每组n=3):采用CCK-8法检测对照组(不做处理)、模型组(给予PDGF-BB 20 mg/L)、干预组(同时给予PDGF-BB 20 mg/L+CK 5μmol/L)细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移;实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)信使RNA(mRNA)的相对表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液中COLⅠ和COLⅢ蛋白的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测COLⅠ、COLⅢ和β-连环蛋白(β-catenin)的相对表达.结果:(1)与对照组比较,模型组中PDGF-BB显著诱导了PASMC的增殖;与对照组比较,模型组PASMC在12 h、24 h的迁移率[(37％vs.26％)、(68％vs.51％)]均呈显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.01).PASMC培养液中,与对照组比较,模型组培养液中COLⅠ蛋白含量升高约3.5倍和COLⅢ蛋白含量升高2.5倍(P<0.01),同时PASMC中COLⅠ、COLⅢ、β-catenin的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P均<0.01).(2)与模型组比较,干预组中CK抑制了PDGF-BB诱导的PASMC增殖;与模型组比较,干预组12 h、24 h迁移率分别为[(16％vs.37％)、(48％vs.68％)]较模型组均明显降低(P均<0.01),PASMC培养液中COLⅠ蛋白含量减少了45％和COLⅢ减少了56％(P<0.01),同时PASMC中COLⅠ、COLⅢ和β-catenin的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.01),差异均有统计学意义.结论:CK明显抑制了PDGF-BB诱导PASMC的增殖、迁移以及胶原沉积,这表明CK可能对胶原沉积类疾病有抑制作用.
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