【摘 要】
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目的 探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制.方法体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scrambl
【机 构】
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重庆医科大学附属医院神经内科,重庆 400016;贵州医科大学附属医院神经内科,贵阳 550004;重庆医科大学附属医院神经内科,重庆 400016
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目的 探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制.方法体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型.将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、OGD/R+LV-scramble组和OGD/R+LV-TREM2组.Real-time PCR检测TREM2 mRNA在OGD/R组细胞复氧72 h内表达情况.免疫荧光染色观察慢病毒LV-scramble和LV-TREM2在正常N9小胶质细胞内转染情况,Real-time PCR和Western blotting验证慢病毒转染效率,Real-time PCR和ELISA检测小胶质细胞M1型标志物肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及M2型标志物精氨酸酶1(Arg-1)和IL-10 mRNA和蛋白表达情况.Western blotting检测磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-ⅠκBα)和ⅠκBα 蛋白含量,免疫荧光分析核因子κB P65(NF-κB P65)蛋白在细胞内分布情况.结果 复氧72 h内,OGD/R组细胞TREM-2 mRNA含量明显增加,高峰位于24 h和48 h;慢病毒LV-TREM2可有效促进OGD/R组细胞 TREM2 mRNA 和蛋白表达(P＜0.001,P＜0.01).与OGD/R 组相比,OGD/R+LV-TREM2组 TNF-α、IL-1β 和iNOS mRNA和蛋白明显降低,而Arg-1和IL-10 mRNA和蛋白含量明显升高(P＜0.05);此外,OGD/R+LV-TREM-2组p-PI3K/PI3K 和p-Akt/Akt比值明显升高(P＜0.05),p-ⅠκBα/ⅠκBα比值显著下降(P＜0.001),且 NF-κB P65蛋白核转位明显被削弱.结论 TREM-2过表达可促进OGD/R模型小胶质细胞向M2型转化从而发挥抗炎作用,该作用与TREM-2调控小胶质细胞PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关.
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