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目的
通过在体外应用TGF-β1诱导瘢痕疙瘩表皮细胞,探讨其是否发生上皮-间质转化,以及上皮-间质转化对表皮细胞中干细胞表面标志的影响。
方法采集耳部瘢痕疙瘩标本培养表皮细胞,以培养基中终浓度为1 ng/ml的TGF-β1诱导瘢痕疙瘩表皮细胞5 d作为实验组,以未诱导的瘢痕疙瘩表皮细胞作为阴性对照组,每组样本均为3例。分别采用免疫荧光染色、Real-time PCR和Western blot检测上皮-间质转化相关标志和基因的表达,并采用Real-time PCR检测表皮干细胞表面标志的表达。采用独立样本t检验对检测结果进行统计学分析。
结果上皮-间质转化相关基因Snail2的mRNA表达从诱导前的0.91±0.23上升至诱导后的1.69±0.10,间质细胞标志波形蛋白由诱导前5.86±2.07明显增加至诱导后的24.29±5.39(P<0.05),而上皮标志E-钙粘蛋白的mRNA表达由诱导前的1.06±0.19下降为诱导后的0.65±0.09,表达减弱;干细胞表面标志CD29和Lgr6的mRNA表达分别由诱导前0.55±0.14和1.61±0.31增加至诱导后1.19±0.12和3.84±0.62,均明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色和Western blot均证实细胞E-钙粘蛋白减少,波形蛋白增加,同时p-Smad3表达增加。
结论TGF-β1通过诱导Snail2基因上调启动瘢痕疙瘩表皮细胞发生上皮-间质转化,此过程有TGF-β1/Smad3信号通路参与,而瘢痕疙瘩表皮细胞中干细胞的表面标志发生改变。