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本研究旨在建立一种快速、准确检测 H4亚型禽流感病毒(AIV )的方法,针对 H4亚型AIV HA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了H4亚型AIV套式RT‐PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出 H4亚型AIV ,对其他常见禽病病原体无交叉;敏感性试验结果显示,该法对 H4亚型AIV检测下限为36.0 fg/μL ;最后用该法对106份临床样品进行检测,临床样品检测结果与病毒分离结果一致。本研究建立的套式RT‐PCR方法为 H4亚型AIV的早期诊断及有效防治提供了快速、特异和敏感的检测方法。