1a，25（OH）2 D3对心肌细胞生物钟基因表达的影响

• 作 者: 陈玉梅 范邁 李杏 李华 吴丽洁 张奇军 程子杰 钱玲梅
• 机 构: 210029,南京医科大学第一附属医院心脏病科
• 出 处: 中华实用儿科临床杂志
• 发表日期: 2016年13期
• 关键词: 1a 25(OH)2 D3 心肌细胞 生物钟 生物钟基因

目的：探讨1a，25（OH）2 D3对心肌细胞生物钟基因 Bmal1 mRNA、Per2 mRNA 和 Rev-erba mRNA表达的影响。方法分离培养7日龄 SD 大鼠乳鼠心肌细胞，并用免疫荧光法鉴定。原代心肌细胞培养72 h后，设置1a，25（OH）2 D35个终浓度梯度即0 nmol／L、1 nmol／L、10 nmol／L、50 nmol／L 和100 nmol／L 处理心肌细胞2 h，然后提取细胞 RNA，实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测生物钟基因（Bmal1、Per2、Rev-erba）表达量变化，以确定1a，25（OH）2 D3最佳处理浓度。再将培养72 h 的原代心肌细胞分为3组，对照组：无血清培养基培养；血清休克组：含体积分数50％马血清的 DMEM培养2 h；1a，25（OH）2 D3处理组：最佳1a，25（OH）2 D3浓度培养2 h。分别于7个时间点（0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h）收集细胞，提取细胞总 RNA，再采用 RT-PCR 分析心肌细胞生物钟基因（Bmal1，Per2，Rev-erba）的转录水平。结果1a，25（OH）2 D3培养浓度为50 nmol／L 时， Bmal1 mRNA 表达水平最高，Per2和 Rev-erba mRNA 表达水平最低。与对照组相比，1a，25（OH）2 D3处理组和血清休克组均引起心肌细胞 Bmal1、Per2和 Rev-erba 基因呈日周期的节律振荡，且 Bmal1和 Per2的表达模式呈相反的时相表达，在12 h 时 Bmal1的表达量出现在波峰，而 Per2的表达量出现在波谷。Rev-erba 的表达变化趋势在8 h 开始上升，在12～16 h 出现最高表达量。结论1a，25（OH）2 D3可影响心肌细胞生物钟基因 Bmal1、Per2和 Rev-erba mRNA 表达。