低剂量紫杉醇抑制成纤维细胞增殖、迁移及硬膜外纤维化研究

• 作 者: 张玉杰 杨建东 蔡俊 朱守雷 田原
• 机 构: 大连医科大学研究生院 116004;苏北人民医院脊柱外科，扬州 225001,苏北人民医院脊柱外科，扬州 225001,苏北人民医院脊柱外科，扬州 225001,苏北人民医院脊柱外科，扬州 22500
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2021年38期
• 关键词: 紫杉醇 成纤维细胞 增殖 凋亡

目的

探究低剂量紫杉醇(PTX)对转化生长因子-β1(TGF-β1)激活的人成纤维细胞(HFs)增殖、迁移能力和硬膜外纤维化的影响及机制。

方法

HFs(购自中国科学院上海细胞库)分为对照组、TGF-β1(5 μg/L)、TGF-β1(5 μg/L)+PTX(10 nmol/L)和PTX(10 nmol/L)组。使用倒置显微镜观察细胞形态，划痕和Transwell实验检测细胞迁移，流式细胞仪分析细胞周期百分比及凋亡率；蛋白印迹法(Western blot)检测各组Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平；使用随机数字法将36只成年雄性SD大鼠分为假手术组、对照组和PTX组，每组12只。术后4周使用苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察各组硬膜外纤维性情况，多组间采用单因素方差分析。

结果

(1)划痕实验结果显示，TGF-β1组HFs 12 h和24 h迁移率为[(31.50±3.98)%、(77.73±3.03)%，F＝60.312，P<0.05]显著高于对照组[(23.47±3.19)%、(50.31±5.31)%]，而PTX组[(14.59±0.58)%、(20.93±0.72)%，F＝52.385，P<0.05]则显著低于对照组。(2)流式细胞学结果显示，TGF-β1组S期细胞百分比显著高于对照组[(30.07±0.39)%比(25.62±1.06)%，F＝27.335，P<0.05]，PTX组G₂期细胞百分比显著高于对照组[(37.55±1.71)%比(24.94±0.51)%，F＝149.725，P<0.05]，而PTX组与对照组之间的细胞凋亡率差异无统计学意义(F＝1.263，P>0.05)。(3)Western blot实验结果显示，TGF-β1组p-Smad3/Smad3显著高于对照组[(129.05±7.66)%，F＝39.615，P<0.05]，而PTX组则显著低于对照组[(42.30±1.73)%，F＝1 215.471，P<0.05]，各组α-SMA和COL1A1的蛋白表达水平与p-Smad3/Smad3趋势一致。(4)动物实验结果表明，对照组观察到更显著的硬膜外纤维化，PTX组成纤维细胞数目和胶原密度[78.00±13.00)、(456.94±112.69) μm²]显著低于对照组[(194.67±7.09)、(1 456.00±71.84) μm²，F＝186.170、168.671，P<0.05]。

结论

低剂量PTX抑制HFs增殖、迁移能力及TGF-β1/Smad3信号途径的激活，改善椎板切除术后硬膜外纤维化。