蛋白营养不良与能量营养不良状态下脓毒症大鼠凝血的变化

• 作 者: 李栋 邹梦娟 王亮 李鑫 马晓春
• 机 构: 中国医科大学附属第一医院重症医学科，沈阳 110001,中国医科大学附属第一医院重症医学科，沈阳 110001,中国医科大学附属第一医院重症医学科，沈阳 110001,中国医科大学附属第一医院重症医学
• 出 处: 中华危重病急救医学
• 发表日期: 2019年31期
• 关键词: Malnutrition Sepsis Inflammatory response Coagulation activation

目的

探讨蛋白营养不良和能量营养不良状态下脓毒症大鼠凝血的变化。

方法

将108只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组36只。正常喂养组给予含18%蛋白饲料27 g/d自由饮食；蛋白营养不良组给予含5%蛋白饲料27 g/d低蛋白自由饮食；能量营养不良组给予含18%蛋白饲料9 g/d低能量饮食。连续喂养4周后，从各组分别选取8只大鼠进行营养不良评价，称量体重以及胸腺、脾脏重量，应用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群比例和M1型巨噬细胞比例，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆白细胞介素（IL-6、IL-10）水平。各组剩余28只大鼠用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型，其中20只用于Kaplan-Meier生存分析；其余8只于术后8 h处死，采用ELISA法检测血浆IL-6、IL-10水平，应用流式细胞仪检测脾脏M1型巨噬细胞比例，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏组织因子（TF）及凝血酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）的mRNA表达。采用Pearson相关法对CLP术后大鼠TF、PAI-1的mRNA表达与IL-6进行相关性分析。

结果

① 4周喂养结束后，正常喂养组和蛋白营养不良组大鼠体重增加，而能量营养不良组丢失初始体重的25%；蛋白营养不良组及能量营养不良组大鼠体重、胸腺和脾脏重量均明显低于正常喂养组。与正常喂养组和蛋白营养不良组比较，能量营养不良组大鼠脾脏CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、M1型巨噬细胞比例以及血浆IL-6水平均明显升高〔CD3⁺T淋巴细胞比例：（52.1±3.7）%比（46.9±3.9）%、（44.5±2.2）%，CD4⁺T淋巴细胞比例：（35.0±3.6）%比（26.3±2.2）%、（25.1±2.3）%，M1型巨噬细胞比例：（8.7±2.0）%比（3.2±1.3）%、（4.2±1.1）%，IL-6（ng/L）：129.4±16.2比48.1±10.0、53.0±8.3，均P<0.05〕。② CLP术后7 d Kaplan-Meier生存分析显示，能量营养不良组大鼠全部死亡，7 d累积生存率明显低于正常喂养组和蛋白营养不良组〔0%（0/20）比35%（7/20）、55%（11/20），均P<0.05〕。正常喂养组大鼠死亡率为65%，符合中度脓毒症死亡率，说明CLP模型制备成功。CLP术后，蛋白营养不良组大鼠血浆IL-6水平明显低于正常喂养组〔IL-6（ng/L）：154.6±34.7比233.4±41.2，P<0.05〕；能量营养不良组大鼠肝脏TF、PAI-1的mRNA表达和血浆IL-6水平均明显高于正常喂养组〔TF mRNA（2^-ΔΔCT）：4.5±2.2比1.1±0.7，PAI-1 mRNA（2^-ΔΔCT）：3.3±1.8比1.3±0.9，IL-6（ng/L）：382.7±118.2比233.4±41.2，均P<0.05〕，脾脏M1型巨噬细胞比例明显低于正常喂养组〔（8.9±2.4）%比（15.2±5.4）%，P<0.05〕。各组大鼠血浆IL-10水平比较差异均无统计学意义。相关分析显示，CLP术后大鼠肝脏TF、PAI-1 mRNA表达与血浆IL-6水平均呈显著正相关（r₁＝0.644、r₂＝0.574，均P<0.01）。

结论

长期持续应激（饥饿）导致大鼠持续慢性炎症状态，并在感染后刺激相关炎性因子释放及凝血系统激活，无持续应激的蛋白营养不良脓毒症大鼠炎性因子释放明显减少。