【摘 要】
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目的研究细粒棘球蚴中的原头蚴特异性抗原Eg-01042的表达、纯化及免疫原性。方法 1分析已经公开发表的细粒棘球绦虫转录组(mRNA)测序数据,筛选六钩蚴中不表达、只在原头蚴中
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院检验系,宁夏医科大学基础医学院
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目的研究细粒棘球蚴中的原头蚴特异性抗原Eg-01042的表达、纯化及免疫原性。方法 1分析已经公开发表的细粒棘球绦虫转录组(mRNA)测序数据,筛选六钩蚴中不表达、只在原头蚴中高表达的抗原分子Eg-01042;2人工合成获得目的基因片段,经亚克隆、诱导表达、亲和层析法纯化重组蛋白rEg-01042,并对重组蛋白进行鉴定;3BALB/c小鼠随机分为3组:rEg-01042+佐剂免疫组、PBS+佐剂对照组和空白对照组,每组21只,分别于背部皮下注射10μg rEg-01042+PBS+佐剂、PBS+佐剂(均为100μL/只),空白对照组不处理,2周后加强免疫(均为100μl/只)。分别于免疫前、首次免疫后的1、2、3、4、5、6周取眼球采血,ELISA检测各时间点3组血清的rEg-01042特异性IgG水平及细胞因子IFN-γ及IL-4水平;4利用原头蚴感染小鼠血清、rEg-01042免疫小鼠血清和小鼠空白对照组血清经Western blot分析重组蛋白的免疫原性。结果 1成功筛选出原头蚴中高表达的抗原分子Eg-01042.;2成功表达、纯化出重组蛋白rEg-01042(为包涵体蛋白);3ELISA检测结果显示,自首次rEg-01042免疫后第2、3、4、5、6周重组蛋白rEg-01042产生的特异性IgG均高于PBS+佐剂组和空白对照组(P<0.01)。首次免疫后5周,IFN-γ及血清IL-4水平高于PBS+佐剂组和空白对照组(P<0.01)。4Western blot结果显示,原头蚴感染小鼠血清和rEg-01042+佐剂免疫组血清均能识别重组蛋白rEg-01042。结论获得细粒棘球蚴差异表达抗原Eg-01042并证实重组蛋白rEg-01042具有较好的免疫原性。
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