高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响

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目的:研究高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响.方法:将体外分离培养的SD乳鼠心肌细胞、心脏成纤维细胞随机分为心肌细胞低糖组(A组),心肌细胞高糖组(B组),心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养高糖组(C组),心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养加转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)中和抗体高糖组(D组),心脏成纤维细胞低糖组(E组),心脏成纤维细胞高糖组(F组).培养0,6,12,24,48,72 h后,倒置显微镜观察细胞形态、拍照并计算心肌细胞表面积,RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(atrial natriuretic pep-tide,ANP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)mRNA表达水平,ELISA检测各组培养液中TGF-β1表达量.结果:培养48 h时,B组心肌细胞表面积比A组显著增加(P<0.05),而C组在培养24h时心肌细胞表面积已显著高于A组(P<0.05).RT-PCR显示B组和D组细胞在培养12 h时,ANP、β-MHC mRNA显著升高(P<0.05),培养24 h时达高峰;而C组在培养6h时ANP、β-MHC mRNA即显著升高(P<0.05),培养12h时达高峰.ELISA检测结果显示,培养12h起B组、D组TGF-β1的表达均显著高于A组(P<0.05),而在培养6h时C组TGF-β1的表达即已显著高于A组(P<0.05).F组各时间点成纤维细胞TGF-β1的表达均高于E组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:心脏成纤维细胞在高糖条件下可能通过旁分泌TGF-β1促进心肌细胞的肥大.“,”Objective:To investigate the effect of cardiac fibroblast on cardiomyocyte hypertrophy induced by high glucose.Methods:Neonatal CFs and CMs isolated from 0-to 3-day-old Sprague-Dawley rats were cultured in vitro,then randomly divided into six groups:CM low glucose group(group A),CM high glucose group(group B),CM and CF co-culture high glucose group(group C),CM-CF co-culture + TGF-β1 neutralizing antibody high glucose group(group D),C F low glucose group(group E),CF high glucose group (group F).After cultured different times (0,6,12,24,48,72),cellular morphologies were observed under the inverted phase contrast microscope,the mRNA levels of cardiomyocyte hypertrophy markers ANP、β-MHC were determinated by RT-PCR,the expression of TGF-β1 evaluated by ELISA.Results:Compared with group A,cell surface area of group B cultured for 48 h increased significantly (P < 0.05),group C cultured for 24 h increased significantly (P < 0.05) respectively.RT-PCR showed that compared with group A,the expression of ANP、β-MHC mRNA of group B and D cultured for 12 h increased significantly (P < 0.05),cultured for 24 h increased at most,group C cultured for 6 h increased significantly (P <0.05),cultured for 12 h increased at most respectively.ELISA showed that compared with group A,the expression of TGF-β1of group B cultured for 12 h increased significantly (P <0.05),group C cultured for 6 h increased significantly (P < 0.05) respectively ; compared with group E,6 h later group F increased significantly (P < 0.05) respectively.Conclusion:Cardiac fibroblasts may via paracrine transforming growth factor-β1 promote cardiomyocyte hypertrophy induced by high glucose.
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