【摘 要】
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本研究旨在筛选获取优质ICM集落的实验方法.以昆明系小鼠为实验动物,采集3.5、4d和4.5 d的胚胎,分别移入DMEM培养液、DMEM+白血病抑制因子(LIF)和小鼠胎儿成纤维细胞共培养体
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本研究旨在筛选获取优质ICM集落的实验方法.以昆明系小鼠为实验动物,采集3.5、4d和4.5 d的胚胎,分别移入DMEM培养液、DMEM+白血病抑制因子(LIF)和小鼠胎儿成纤维细胞共培养体系中进行培养,观察比较内细胞团( ICM)从透明带中孵出的时间、孵化囊胚贴壁情况以及ICM集落形成情况.结果表明:妊娠3.5 d的胚胎61％为桑椹胚,需要经过4～5 d的体外培养才能形成ICM集落；妊娠4d的扩张囊胚经过3～4 d的共培养后形成ICM集落；妊娠4.5 d的孵化囊胚经过1～2 d的共培养即可形成ICM集落；ICM形成率以妊娠4.5 d的胚胎最高,显著高于妊娠4d和3.5 d的胚胎(P＜0.01),但妊娠4.5d冲出孵化囊胚数量显著降低(P＜0.01)；小鼠胎儿成纤维细胞共培养体系优于DMEM和DMEM+LIF培养液.因此,采集妊娠4d的昆明小鼠胚胎,选择小鼠胎儿成纤维细胞共培养体系,在体外培养3～4 d,能够有效分离培养出可用于胚胎干细胞研究的优质ICM.
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