【摘 要】
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旨在探究孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因对湖羊卵泡颗粒细胞体外增殖与凋亡的影响.利用RT-PCR技术扩增和克隆获得PGR基因编码序列(CDS),通过生物信息学软件对其氨
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院动物科技学院,江苏泰州225300;扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009;江苏农牧科技职业学院动物科技学院,江苏泰州225300;南京农业大学动物科技学院,江苏南京21
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旨在探究孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因对湖羊卵泡颗粒细胞体外增殖与凋亡的影响.利用RT-PCR技术扩增和克隆获得PGR基因编码序列(CDS),通过生物信息学软件对其氨基酸序列及同源性进行比对;用所获得序列构建过表达载体和干扰siRNA,分别转染湖羊颗粒细胞,并用CCK8技术检测颗粒细胞的细胞活力;采用RT-qPCR和Western blot技术,检测细胞周期和凋亡的相关基因或蛋白表达水平.结果 显示,羊PGR基因的CDS区全长2 736 bp,编码911个氨基酸;与其他物种氨基酸序列的同源性为39.66%~95.44%.干扰PGR基因通过下调CDK4、Bcl-2和上调Caspsa3、Caspase8、BAX基因mRNA的表达(P<0.05),进而抑制颗粒细胞的增殖,但对CyclinD1未产生影响(P>0.05);过表达PGR基因通过上调CDK4、CyclinD1、Bcl-2和下调Caspase3、Caspase8、BAX基因mRNA的表达(P<0.05),进而促进颗粒细胞的增殖;BAX蛋白表达变化与对应mRNA的表达趋势一致(P<0.05);过表达PGR基因显著上调PCNA基因表达,而干扰PGR基因则下调PCNA蛋白表达(P<0.05).研究表明,PGR基因通过调控细胞周期和凋亡关键基因的表达,影响湖羊颗粒细胞的增殖与凋亡,进而调节湖羊卵泡发育.
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