猪IL-18 mRNA定量RT—PCR检测方法的建立

• 作 者: 王霞泰 汤世坤 周双海 刘凤华
• 机 构: 北京农学院动物科学技术系
• 出 处: 北京农学院学报
• 发表日期: 2008年4期
• 关键词: 猪 IL-18 竞争定量PCR porcine IL-18 quantitative competitive PCR
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（项目编号：30600442）,北京市自然科学基金资助项目（项目编号：6082008）,北京市属市管高校人才强教计划项目（项目编号：2007）

根据GenBank中猪白介素（IL）-18基因序列，设计1对引物，用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段，将其与pGEM-T Easy载体连接，经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后，构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411bp片段共用同1对引物，但缺失174bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法，建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线，得到其直线回归方程y=0．5832 x-2．9034（R^2=0．