【摘 要】
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对Candida utilis来源的尿酸酶进行定点修饰,并对修饰前后尿酸酶酶学性质的改变进行了研究。PEG修饰使尿酸酶的最适pH往中性偏移,最适温度反应曲线展宽,与底物亲和力增加但最
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对Candida utilis来源的尿酸酶进行定点修饰,并对修饰前后尿酸酶酶学性质的改变进行了研究。PEG修饰使尿酸酶的最适pH往中性偏移,最适温度反应曲线展宽,与底物亲和力增加但最大反应速率降低,在低离子强度条件下更加稳定,对尿酸酶结合金属离子及阴离子的能力有弱化作用。研究结果显示:PEG修饰不仅可以通过屏蔽效应改善尿酸酶的药代动力学性质,也可能通过影响尿酸酶亚基解离、亚基表面电荷分布等性质而影响尿酸酶的酶学性质。这些结果为新药开发PEG-尿酸酶提供了基础。
The uricase from Candida utilis was modified by site-directed mutagenesis and the changes of enzymatic properties of uricase before and after modification were studied. PEG modified the optimum pH of uricase to neutral shift, the optimum temperature response curve broadened, increased affinity with the substrate but the maximum reaction rate decreased under the conditions of low ionic strength more stable, uricase-bound metal ions and anions The ability to weaken the role. The results showed that the modification of PEG could not only improve the pharmacokinetics of uricase by shielding effect, but also affect the enzymatic properties of uricase by affecting the dissociation of uricase subunit and the distribution of subunit surface charge. These results provide the basis for new drug development of PEG-uricase.
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