【摘 要】
：
目的:探讨沉默人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231中beclin 1(BECN1)基因后其生物学特性的变化.方法:设计3组沉默BECN1基因的慢病毒(干扰组1、干扰组2和干扰组3)以及阴性对照慢病毒(NC组)分别转染MDA-MB-231维胞,空白组不做处理.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BECN1 mRNA表达,蛋白免疫印迹(WB)实验检测各组细胞BECN1蛋白与自噬标志蛋白LC3B的表达,筛选出抑制率最高的一组用于后续实验.细胞计数试剂8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况、Tr
【机 构】
：
广西医科大学第二附属医院,南宁530007
论文部分内容阅读
目的:探讨沉默人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231中beclin 1(BECN1)基因后其生物学特性的变化.方法:设计3组沉默BECN1基因的慢病毒(干扰组1、干扰组2和干扰组3)以及阴性对照慢病毒(NC组)分别转染MDA-MB-231维胞,空白组不做处理.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BECN1 mRNA表达,蛋白免疫印迹(WB)实验检测各组细胞BECN1蛋白与自噬标志蛋白LC3B的表达,筛选出抑制率最高的一组用于后续实验.细胞计数试剂8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况、Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力、流式细胞术检测各组细胞凋亡率与周期分布情况.结果:慢病毒感染细胞后,干扰组2中BECN1的信使核糖核酸(mRNA)与蛋白的表达量最低(P＜0.05),WB结果显示干扰组2的LC3B蛋白中LC3-Ⅱ/LC31-Ⅰ的比值明显低于空白组和NC组(均P＜0.05),选取干扰组2用于后续实验.沉默BECN1基因后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P＜0.05);流式细胞术结果显示干扰组2、NC组与空白组的凋亡率没有明显差异;相比于空白组与NC组,干扰组2处于G0/G1期的比例升高(P＜0.05).结论:BECN1基因沉默可以降低细胞的自噬水平,抑制TNBC MDA-MB-231细胞增殖、迁移与侵袭能力.
其他文献
白芍总苷可以改善动脉粥样硬化程度和心肌重构、减轻心肌缺血、缩小心肌梗死面积、减轻心肌缺血再灌注损伤,具有心肌和血管保护作用,其机制与调节血脂、抗血小板聚集、抑制氧化应激、减轻炎症损伤、抑制细胞凋亡/焦亡相关.通过系统梳理文献,深入探讨白芍总苷的心血管保护效应及其作用机制,为白芍总苷防治心血管疾病提供新策略.
目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响.方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态.将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组.LPS组用 100ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与 1 μg/mL Klotho和 100ng/mL LPS+LPS共同处理.RT-qPC
目的:基于高通量测序结合生物信息学挖掘人新miRNA分子,以期为疾病诊治提供理论基础.方法:分别提取4例正常人和乳腺癌患者的血清外泌体,通过Illumina HiSeq SE50高通量miRNA测序,滤掉已知miRNA后,用Bowtie2筛选出与人全基因组数据库(GRCh38.P13)匹配的序列,再用MIREAP和RNAfold软件筛选出新miRNA候选序列.分别收集18例正常人和29例乳腺癌患者血清,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其中两个新miRNA的表达水平.最后通过miRWalk 2.0
目的:探讨Let-7b-5p调控电子转移黄素蛋白A(ETFA)表达对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响.方法:体外培养VSMCs,分为正常对照组和钙化组.钙化组用含β-甘油磷酸钠(β-GP)的培养基培养14 d诱导VSMCs钙化,通过茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色观察VSMCs钙化情况.分别将Let-7b-5p mimic、Let-7b-5p inhibitor、ETFA siRNA及相应对照转染VSMCs,并诱导细胞钙化.用RT-qPCR法检测细胞Let-7b-5p、ETFA及Run
目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对脊髓损伤(SCI)后大鼠血液和脊髓中炎症水平及其体重和运动功能的影响.方法:构建SCI模型,分为假手术组、模型组和TFHL低剂量组、TFHL中剂量组、TFHL高剂量组3个剂量组.予不同浓度TFHL灌胃,Basso-Beattie-Bresnahan评分评价大鼠的运动功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测大鼠的白细胞介素(IL)-17A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4等炎症因子的水平,
目的:探讨桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性及作用机制.方法:通过体外抑菌试验,测定桂千金子乙醇提取物及其乙酸乙酯、正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),比较标准菌株金黄色葡萄球菌(SA)及临床分离的金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性大小.测定桂千金子乙醇提取物作用后MRSA碱性磷酸酶(AKP)活性、外流DNA/RNA大分子含量、胞内蛋白含量的变化,采用电镜观察MRSA细胞形态.结果:桂千金子提取物对3种供试菌株的抑
目的:从临床、影像及病理学三方面对Pristane诱导的小鼠弥漫性肺泡出血(DAH)进行综合评估,为后续探讨DAH的治疗提供评价指标.方法:以C57BL/6J雌性小鼠为研究对象,随机分为实验组和正常对照组,每组9只,并分别予腹腔注射0.5mL的Pristane或等量PBS.观察小鼠一般情况、贫血程度、肺部影像学变化以及肺组织病理学改变.结果:与正常对照组比较,实验组小鼠出现足底苍白无血色、行动迟缓、呼吸急促;体重下降(P＜0.001);贫血(P＜0.05);影像学改变(小鼠肺部CT提示双侧弥漫性肺泡浸润)
目的:采用网络药理学方法探究左归丸对治疗骨质疏松的有效活性成分、作用靶点和潜在分子机制.方法:利用TC-MSP数据库预测左归丸活性成分,筛选潜在的活性成分及作用靶点,在GeneCards数据库检索出骨质疏松相关的疾病靶点基因,通过Drugbank和Uniprot数据库筛选后,得到左归丸—骨质疏松疾病交集基因.采用Cytoscape3.8.2软件构建药物成分—疾病网络图,利用交集基因构建蛋白质互作网络,并获得左归丸治疗骨质疏松的核心网络和核心靶点基因,利用MCODE和Metascape数据库分析核心靶点基因
目的:探讨粪菌移植疗法(FMT)对大鼠脊髓损伤(SCI)后的作用.方法:将36只SD大鼠随机分为对照组(A组)、SCI组(B组)、FMT组(C组),每组12只.A组仅手术暴露,不进行击打,B组和C组用改良Allen\'s击打法建立SCI模型.C组灌胃给予粪菌液,连续14d.对16SrDNAV3-V4高度保守区进行HiSeq平台测序,比较SCI后肠道菌群变化,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脊髓组织IL-17、IL-4和I
目的:探讨褪黑素(MT)通过抑制小胶质细胞增殖、激活对布比卡因脊髓神经毒性大鼠模型的神经保护的作用机制.方法:选择24只SPF级雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、生理盐水组(N组)、布比卡因组(B组)、褪黑素与布比卡因共处理组(M组).4组大鼠行鞘内置管后分别做如下处理:B组及M组各鞘内注射5％布比卡因0.12mL/kg,N组鞘内注射生理盐水0.12mL/kg,每组各给药3次,每次间隔90min;M组鞘内注射后立即腹腔注射MT12.5mg/kg,B组及N组鞘内注射后立即腹腔注射与M组等量MT溶媒