【摘 要】
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目的构建人可溶性Tim-3（sTim-3）的重组质粒表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增Tim-3基
【机 构】
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广西医科大学第一附属医院神经外科,广西壮族自治区人民医院妇产科,广西壮族自治区人民医院检验科
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目的构建人可溶性Tim-3（sTim-3）的重组质粒表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增Tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的表达载体pET28a-EGFP中,鉴定阳性克隆。重组质粒转化BL21（DE3）,通过调整IPTG浓度、诱导时机、诱导温度与诱导时间优化蛋白表达条件。结果成功构建原核表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,并转化BL21（DE3）进行诱导表达。温度和IPTG浓度对蛋白表
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