鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因真核表达载体的构建及其在动物细胞中的表达

• 作 者: 杨慧 陈吉祥 张晓华 李筠 薛小平
• 机 构: 西北工业大学生命科学院,中国海洋大学海洋生命学院
• 出 处: 化学与生物工程
• 发表日期: 2010年2期
• 关键词: 鳗弧菌W-1 金属蛋白酶 真核表达 基因疫苗 Vibrio anguillarum W-1 metalloprotease eukaryotic express
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（30371108,30972275）,国家8.63计划资助项目（2007AA09Z416）,国家973计划资助项目（2006CB101803）

采用基因克隆方法，以带有突变的鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因的原核表达质粒pET24d（＋）／m-empA7为模板，通过PCR扩增得到m-empA7基因，将其插入pCDNA3．1（＋）构建重组真核表达质粒pCDNA3．1（＋）／m-empA7；然后用磷酸钙法将其转染入动物细胞CHO和HEK293T中并进行瞬时表达，分别以RT-PCR和Western-blot检测重组质粒的基因转录和蛋白表达情况。结果表明，成功将突变的鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因转染至真核细胞中，并能够在动物细胞中正确地转录和表达，为鳗弧菌基因工