【摘 要】
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目的 研究LoxP序列小片段重组阳性克隆的筛选和鉴定方法.方法采用合成的LoxP为上游引物,载体互补的序列为下游引物,直接以菌落为模板进行聚合酶链反应(PCR),电泳分离出784 bp的条带者为阳性;PCR阳性克隆再用酶切法进行对比鉴定及DNA测序分析确证.结果用菌落PCR法随机筛选的6个菌落中3个为阳性,随机取1个阳性克隆进行DNA序列分析,证实含有LoxP插入序列.用酶切法对此3个阳性克隆进行
【机 构】
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400038,重庆,第三军医大学西南医院全军感染病研究所,400038,重庆,第三军医大学西南医院全军感染病研究所,400038,重庆,第三军医大学西南医院全军感染病研究所
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目的 研究LoxP序列小片段重组阳性克隆的筛选和鉴定方法.方法采用合成的LoxP为上游引物,载体互补的序列为下游引物,直接以菌落为模板进行聚合酶链反应(PCR),电泳分离出784 bp的条带者为阳性;PCR阳性克隆再用酶切法进行对比鉴定及DNA测序分析确证.结果用菌落PCR法随机筛选的6个菌落中3个为阳性,随机取1个阳性克隆进行DNA序列分析,证实含有LoxP插入序列.用酶切法对此3个阳性克隆进行鉴定,3个克隆和未进行酶切的对照均出现100 bp以下模糊带,结果不能判断.结论自身引物菌落PCR法用于筛选和鉴定LoxP序列重组阳性克隆是一种快速、简便、经济、高效的方法。
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