大鼠ACAT的N末端片段(氨基酸1～126)在大肠杆菌中的融合表达及纯化

• 作 者: 张春妮 垮田秀树 宫崎章 松田浩史 堀内正公
• 机 构: 南京军区南京总医院!解放军医学检验中心,日本熊本大学医学部生化系
• 出 处: 医学研究生学报
• 发表日期: 1999年4期
• 关键词: 乙酰辅酶A 胆固醇酰基转移酶(ACAT) 融合表达 大肠杆菌 动脉粥样硬化 Acylcoenzyme A Cholesterol acyltransferas

目的： 重组法制备纯化乙酰辅酶Ａ：胆固醇酰基转移酶（ＡＣＡＴ）Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）。　方法：经ＰＣＲ扩增得到的ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）用ＥｃｏＲＩ酶解，插入到表达载体ｐＧＥＸ－２ＴＫ中，得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－２ＴＫ／ＡＣＡＴ（氨基酸１～１２６）。阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－Ａ－ＣＡＴ（氨基酸１～１２６），重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ亲和柱纯化。　结果：ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析显