【摘 要】
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为了研究A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白的免疫原性,试验采用PCR方法从口蹄疫阳性质粒p MD-18-P1中扩增得到目的基因VP1,与原核表达载体p ET-28a连接,构建重组质粒p ET-28a-VP1,
【机 构】
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广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室; 华南农业大学兽医学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原微生物国家重点实验室;
【基金项目】
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科技部农业科技成果转化基金项目(2013GBZE000352);广东省科技厅重点实验室建设支撑项目(2012A061100006);广东省农业科学院院长基金项目(201530);广东省主体机构创新能力建设专项(2011)
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为了研究A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白的免疫原性,试验采用PCR方法从口蹄疫阳性质粒p MD-18-P1中扩增得到目的基因VP1,与原核表达载体p ET-28a连接,构建重组质粒p ET-28a-VP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,筛选的阳性菌落用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,通过Western-blot分析蛋白的免疫原性,并用镍亲和树脂纯化鉴定后的重组蛋白。结果表明:重组质粒p ET-28a-VP1经PCR及酶切鉴定证明构建正确;重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为26 ku,且能被口蹄疫阳性血清识别;镍亲和树脂纯化的蛋白条带单一。说明该蛋白具有免疫学活性,且纯度较高。
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