真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达术

• 作 者: 陈杰 高下 朱敏生 张文程 麻晓峰 顾香芳
• 机 构: 南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科,南京大学模式动物研究所
• 出 处: 中国现代医学杂志
• 发表日期: 2007年18期
• 关键词: Hath1 基因克隆 真核表达载体 脂质体 hath1 gene clone eukaryotic expression vector cationic
• 基金项目: 南京市医学重点科技发展项目资助（编号：ZKX0207）

目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1，并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板，经PCR获得Hath1-cDNA，将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoI、EcoRI双酶切，酶切产物琼脂糖凝胶电泳，割胶纯化，前者回收1065bp片断，后者回收大片断，再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接，转化感受态DH5q细胞，挑选单克隆，提取质粒，将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath