【摘 要】
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目的:鉴定及筛选表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的候选工程细胞株。方法:对实验室前期筛选到的Mab1#及Mab2#2个候选细胞株的3 L摇瓶流加培养12 d并经Protein A一步柱层
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室,中国生物技术股份有限公司科研与国际合作部,
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目的:鉴定及筛选表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的候选工程细胞株。方法:对实验室前期筛选到的Mab1#及Mab2#2个候选细胞株的3 L摇瓶流加培养12 d并经Protein A一步柱层析纯化的抗体样品,进行紫外光谱全波长扫描,采用LC-MS测定精确相对分子质量进行鉴别,采用SDS-PAGE(还原型及非还原型)进行分子完整性分析,采用SEC-HPLC进行集聚倾向性分析,采用IEF进行等电点(p I)测定及对N-糖苷酶(PNGase F)酶切前后样品的电荷进行比较分析,采用CEX-HPLC进行电荷异质性分析。同时,对Mab1#及Mab2#2个候选细胞株的3个月传代稳定性进行比较研究。结果:Mab1#及Mab2#2个候选细胞株表达抗体的紫外最大吸收波长均为280 nm;LC-MS轻链相对分子质量分别为23 464.82和23 465.06,重链(G0F糖型)相对分子质量分别为50 807.50 Da和50 807.48 Da,均与理论预期相符;SDS-PAGE(还原型及非还原型)电泳结果显示表达的抗体分子完整性好;SEC-HPLC聚集倾向分析显示2株单抗经一步Protein A亲和柱层析后的可溶性聚合体的含量均小于2%;IEF结果显示Mab1#和Mab2#p I分别为8.38和8.44,PNGase F酶切前后未见明显的由于糖基化修饰引起的电荷变异体。CEX-HPLC结果显示2株单抗的电荷均一性好,酸性变体及碱性变体含量之和均小于4%。完成的3个月细胞株稳定性研究结果显示Mab1#及Mab2#2株克隆均稳定。结论:Mab1#及Mab2#2个候选细胞株具有相似的目标抗体表达量、表达抗体的质量(分子完整性、聚集倾向、电荷异质性、亲和力)、以及细胞稳定性特征和细胞生长代谢特征等质量属性,均符合制定的阶段筛选目标。
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