【摘 要】
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目的 检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子(PDGF)对人类脐带间质干细胞(MSC)的感染能力,为将其用于基因治疗奠定基础.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增人类PDGF
【机 构】
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中国医学科学院,中国协和医科大学血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,300020
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目的 检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子(PDGF)对人类脐带间质干细胞(MSC)的感染能力,为将其用于基因治疗奠定基础.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增人类PDGF的cDNA序列,构建重组病毒载体AdPDGF.分离培养人类脐带MSC.体外以不同感染复数感染MSC后,流式细胞术检测感染效率,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达.锥虫蓝染色及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测感染后细胞生存活力及增殖能力.酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中PDGF分泌水平.结果 成功构建病毒载体AdPDGF.其对MSC的感染效率随感染复数增加而增高,当感染复数为50时,达到最高,为87.36%.未感染的MSC、感染AdPDGF和对照病毒的MSC活力分别为(97.8 ±2.3)%、(91.9 ±4.0)%和(92.8 ±4.0)%.增殖能力分别为(100 ±16.8)%,(95.9±12.0)%和(87.5±9.7)%,感染AdPDGF的MSC与两个对照比较差异均无统计学意义(P>0.05).感染48 h后MSC能有效分泌PDGF,感染复数为10、30、50时,PDGF分泌水平分别为(1.53±0.37)、(3.03 ±0.68)和(5.25±0.92)ng/ml,MSC-GFP及MSC组未检测到有PDGF分泌.结论 成功构建AdPDGF重组腺病毒并高效感染人类脐带MSC.
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