由大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化和鉴定

• 作 者: 周永春 贾林 陆峰 金永明 林爱友
• 机 构: 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所!上海200433,第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所!上海200433,第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所!上海200433,第二军医大学医学生物
• 出 处: 药物生物技术
• 发表日期: 1997年02期
• 关键词: 大肠杆菌表达 末端序列 重组大肠杆菌 蛋白分子 酸性蛋白 包涵体 等电点 离子交换层析 生物学活性 疏水层析

由重组大肠杆菌表达的人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (rh GM- CSF)通过包涵体抽提、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换层析获得纯度达到 97%的产品 ,比活为 3.2× 10 7IU/ mg,分子量为 14.84 k D.纯化获得的 rh GM- CSF为一酸性蛋白 ,等电点约为 5.2 ,NH2 ,-末端序列测定与文献报道一致 ,NH2 -末端不均一 ,其中带 Met的分子约占 59.5% ,成熟蛋白分子约占 2 5%。蛋白的纯化倍数为 3.9,生物活性回收率为 85.3%。

Purity of 97% was achieved by inclusion body extraction, gel filtration, renaturation, hydrophobic and ion exchange chromatography of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rh GM-CSF) expressed by recombinant E. coli The activity was 3.2 × 10 7 IU / mg and the molecular weight was 14.84 k D. The purified rh GM-CSF was an acidic protein with an isoelectric point of about 5.2 and NH2. The determination of the terminal sequence was consistent with that reported in the literature. NH2-terminal heterogeneity , Of which Met molecules accounted for about 59.5%, mature protein molecules accounted for about 25%. Protein purification was 3.9, biological activity recovery was 85.3%.