利用CRISPR／Cas9技术敲除RNA甲基化酶TRDMTl基因及其功能初探

• 作 者: 徐慧 孙振 薛松磊 豆春峰 胡序明 崔恒宓
• 机 构: 扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所,扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室
• 出 处: 扬州大学学报：农业与生命科学版
• 发表日期: 2018年2期
• 关键词: HEK293细胞系 RNA甲基化 m5C TRDMTl基因 CRISPR/Cas9 HEK293 cellsRNA methylatiom m5CTRDMT1
• 基金项目: 国家自然科学基金重大研究计划项目（91540117）,国家自然科学基金面上项目（81773013、81372237）,国家自然科学基金青年基金项目（31602032）,江苏省高校优势学科建设工程项目（2014lO）

为构建TRDMTl基因敲除的HEK293细胞系，利用CRISPR／Cas9系统在TRDMTl基因第1个外显子前插入BGHPloy（A）转录终止序列，终止TRDMTl基因表达。利用重叠PCR方法合成sgRNA序列，构建TRDMTl-gRNA载体及含不同抗生素基因的同源重组载体TRDMTl-LOXN-Puro和TRDMTl-LOXP-Neo；将同源重组载体TRDMTl-LOXN-Puro、TRDMTl-LOXP-Neo及TRDMTl-gRNA、Cas9表达载体MI。M3613共转染HEK293细胞；利用Pur