RNA干扰抑制RPA70基因质粒载体的构建与鉴定

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LUXU_ZHANG
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目的构建含复制蛋白A70(RPA70)基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达质粒,诱导RNA干扰(RNAinterference,RNAi)。方法根据GenBank中RPA70基因的mRNA序列,设计、合成2条反向重复多聚寡核苷酸序列,退火形成双链DNA。利用分子克隆技术,将含RPA70基因的双链DNA与经双酶切后的载体psi—U6-GFP—Neo连接,构建psi—U6-GFP—Neo—shRNA—RPA70重组质粒,通过DNA测序证实表达质粒构建成功。设空白对照组、阴性对照
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