【摘 要】
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目的 制备日本血吸虫复合B细胞表位抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 用生物信息学软件(BioSun)预测已报告的日本血吸虫Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26等3个B细胞表位片段的基因序列(
【机 构】
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江苏省血吸虫病防治研究所,无锡市第三人民医院
【基金项目】
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江苏省血吸虫病、寄生虫病、地方病基金;江苏省预防医学科研项目
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目的 制备日本血吸虫复合B细胞表位抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 用生物信息学软件(BioSun)预测已报告的日本血吸虫Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26等3个B细胞表位片段的基因序列(P2、P6、P7),用随机顺序法连接3个片段,克隆入高效融合表达载体pET-32c(+)中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,经酶切及基因测序鉴定重组子.阳性克隆经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱纯化,用蛋白质印迹(Western blotting)分析该表达产物的抗原性.结果 3个目的 表位基因片段按P2-P6-P7和P6-P2-P7的顺序连接为2条复合表位片段(表位间由6个氨基酸组成的柔性接头连接),成功克隆入pET-32c(+).其重组子均可表达相对分子质量(Mr)约20 400的融合蛋白.亲和层析纯化的融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一条带(Mr20 400),Westernblotting分析显示,这2条重组复合表位蛋白均可被日本血吸虫病患者血清识别,而不与健康者血清反应.结论 获得2个具有日本血吸虫病诊断潜在价值的复合B细胞表位抗原.
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