【摘 要】
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目的构建pcDNA3肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNFα)真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达.方法用双酶切方法由pBluescript/TNFa克隆载体上切下702bp的TNF
【机 构】
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武警内蒙古总队医院外一科,内蒙古自治区医院神经内科,中国预防医学科学院病毒所基因室
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目的构建pcDNA3肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNFα)真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达.方法用双酶切方法由pBluescript/TNFa克隆载体上切下702bp的TNFa基因片段,将其克隆至pcDNA3真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞,了解其在真核细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性.结果pcDNA3 TNFα重组体经酶切后出现699bp片段,测序分析与文献报告结果完全一致,表明重组pcDNA3 TNFa表达质粒克隆成功.可见pcDNA3TNFα质粒在真核动物细胞中得到表达,TNFa蛋白能够杀伤L929细胞,表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有生物活性的TNFa蛋白.结论以脂质体介导pcDNA3 TNFa质粒转染真核细胞为基因治疗奠定了一定基础.
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