【摘 要】
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目的：构建人14-3-3σ基因的原核表达载体，获得其原核表达产物，并对融合蛋白进行纯化及活性检测。方法：采用PCR技术从人乳腺文库中扩增14-3-3σ基因编码序列，将其克隆到pGEX-KG载体
【机 构】
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解放军总医院第一附属医院,军事医学科学院生物工程研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金（31100604）
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目的：构建人14-3-3σ基因的原核表达载体，获得其原核表达产物，并对融合蛋白进行纯化及活性检测。方法：采用PCR技术从人乳腺文库中扩增14-3-3σ基因编码序列，将其克隆到pGEX-KG载体中，重组质粒转化大肠杆菌Rossate后表达重组蛋白，利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化，并通过SDS-PAGE和Western印迹检测融合蛋白的表达，采用GST pull-down技术检测已纯化的蛋白与已知体外相互作用蛋白AKT之间的相互作用。结果：从人乳腺文库中扩增获得约750 bp
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