【摘 要】
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目的 通过生物信息学分析预测曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶(SmFBPase)的生物学特性,同时对SmFBPase进行基因克隆及蛋白原核表达. 方法 通过NCBI网站对SmFBPase基因序列进行
【机 构】
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宁波市奉化区人民医院共体总院,浙江宁波315500;广元市中心医院;海南医学院热带医学与检验医学院,海南海口571199;海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室;海南省人民医院
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目的 通过生物信息学分析预测曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶(SmFBPase)的生物学特性,同时对SmFBPase进行基因克隆及蛋白原核表达. 方法 通过NCBI网站对SmFBPase基因序列进行开放阅读框分析和核苷酸序列同源性分析.通过ExPASy网站预测SmFBPase的理化性质、结构及表位等特性.构建pET-28α-SmFBPase重组质粒,并转化入E.coliBL21 (DE3)菌株,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷对其诱导表达,用Western blot进行鉴定. 结果 SmFBPase由337个氨基酸组成,无信号肽、无跨膜区,理论相对分子质量约37×103,为稳定胞内蛋白.SmFBPase的氨基酸序列与人FBPase的氨基酸序列一致性为61.77％,且进化树中两者亲缘性较远,该蛋白含有13个B细胞表位.PCR、双酶切鉴定及测序分析,证明重组质粒构建成功.Western blot显示重组质粒转化BL21后成功诱导表达SmFBPase蛋白. 结论 生物信息学分析SmFBPase是一个具有潜在研究价值的药物靶点,原核表达的SmFBPase具有反应原性,为研究其糖代谢规律奠定了基础.
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