【摘 要】
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[背景]解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段.[目的]在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统.[方法]首先,分析解纤维梭菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度,并以β-葡萄糖苷酶为报告基因,检测其在解纤维梭菌中的诱导效果.然后,将脱水四环素诱导型操纵子与Ⅱ型内含子元件组合,构建脱水四环素诱导的ClosTron质粒.最后,以解纤维梭菌mspI、ldh和ack为例,检测其在解纤维梭菌中的打靶效率.[结果]脱
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院微生物学教研室 贵州贵阳 550025;地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室 贵州贵阳 550004;贵州医科大学基础医学院微生物学教研室 贵州贵阳 550025;贵州医科大学
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[背景]解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段.[目的]在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统.[方法]首先,分析解纤维梭菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度,并以β-葡萄糖苷酶为报告基因,检测其在解纤维梭菌中的诱导效果.然后,将脱水四环素诱导型操纵子与Ⅱ型内含子元件组合,构建脱水四环素诱导的ClosTron质粒.最后,以解纤维梭菌mspI、ldh和ack为例,检测其在解纤维梭菌中的打靶效率.[结果]脱水四环素诱导系统在解纤维梭菌中能够诱导ClosTron元件表达,在mspI、ldh和ack这3个基因位点的打靶效率分别为29.48％± 15.51％、23.61％±7.08％和28.09％±6.97％.[结论]在解纤维梭菌中成功构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统,为梭菌基因工程改造奠定了基础.
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芽胞杆菌属具有良好的蛋白表达和分泌能力,在工业酶的生产中被广泛应用,是理想的工业宿主菌,但实现蛋白分泌表达的普遍高效性还存在许多瓶颈.本文综述了芽胞杆菌的蛋白分泌表达策略,从启动子、信号肽、分泌途径、宿主和培养条件这5个方面总结了提高芽胞杆菌中分泌表达重组蛋白的方法,对芽胞杆菌高效生产工业酶有一定的参考价值,最后展望了优化芽胞杆菌分泌表达的研究方向,各种新型生物技术的发展必将推进芽胞杆菌在分泌表达领域有更深入的应用.
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