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摘 要：目的：采用高效液相色谱法建立奥曲肽注射液有关物质的检查方法。方法：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水880ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（900：100）作为流动相A；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水380ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（400：600）作为流动相B；检测波长为210nm；流速为1.0ml/min，进行梯度洗脱。结果：本方法专属性试验、最小检测限试验、耐用性试验均符合方法学试验要求。三批供试品有关物质检查均符合规定。结论：该测定方法操作简便、准确度高、可靠、操作性强，可作为奥曲肽注射液的有关物质的测定方法，以控制其质量。
关键词：高效液相色谱法；奥曲肽；有关物质
奥曲肽是人工合成的八肽环状化合物，是生长抑素的类似物，其半衰期（1.5小时）比生长抑素长。其临床主要用于：（1）食道-胃静脉曲张出血。（2）预防胰腺术后并发症。（3）类癌综合征的类癌瘤。（4）经手术、放射治疗或多巴胺受体激动剂治疗失败的肢端肥大症等。本文根据拟定的奥曲肽注射液的反相高效液相色潽法（RP-HPLC）有关物质测定方法，进行了方法学研究，为奥曲肽注射液的进一步研究提供了可靠的分析方法及理论依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪；MS105型精密电子天平（梅特勒）；脱苏氨醇8奥曲肽对照品（2mg，批号140795-201001，中检所）；醋酸奥曲肽对照品（20mg，批号140730-201303，中检所）；醋酸奥曲肽注射液（1ml：0.2mg，自制，批号：20150101、20150102、20150103）；四甲基氢氧化铵、磷酸、乙腈均为色谱纯，水为注射用水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dikma C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水880ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（900：100）作为流动相A；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水380ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（400：600）作为流动相B；按下表进行梯度洗脱。
流速：1.0ml/min；柱温25℃；检测波长：210nm；进样量：20μl。取脱苏氨醇8奥曲肽与醋酸奥曲肽对照品适量，加水溶解并制成每1ml中各约含脱苏氨醇8奥曲肽10μg和醋酸奥曲肽0.1mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按奥曲肽峰计算不低于3000；脱苏氨醇8奥曲肽与奥曲肽峰的分离度应符合要求。
2.2 检查方法
取本品适量，加水稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，除去相对保留时间小与0.5的色谱峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（2.0%），各杂质峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（4.0%）。
2.3 专属性
照2.2 检查方法中供试品溶液配制方法，制得供试品溶液。另取本品处方制剂的空白辅料适量，按上述方法制备成空白辅料溶液。
酸破坏溶液：取本品适量，加入0.1mol/L盐酸溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成酸破坏溶液。同时不加本品制成空白酸破坏溶液。
碱破坏溶液：取本品适量，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L盐酸溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成碱破坏溶液。同时不加本品制成空白碱破坏溶液。
氧化破坏溶液：取本品适量，加入0.5%过氧化氢溶液1ml，室温放置30min后，按上述方法稀释制备成氧化破坏溶液。同时不加本品制成氧化破坏溶液。
高温破坏溶液：取本品，置于60℃条件加热120min后，按上述方法稀释制备成高温破坏溶液。
光照破坏溶液：取本品，置于4500±500lx光照条件下照射15天后，按上述方法稀释制备成光照破坏溶液。
取上述溶液及系统适用性溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果表明：本有关物质检查方法条件下，空白辅料溶液不干扰主峰及杂质峰的检出。能够有效检出各破坏性试验溶液中产生的降解产物。且降解产物峰均能与主成分峰达到基线分离。系统适用性溶液中，脱苏氨醇8奥曲肽与奥曲肽峰的分离度大于2.0，表明本方法对相关降解产物及已知杂质检查的专属性较好。
2.4 最小检测限考察
取本品适量，加水进行梯度稀释，按检查方法色谱条件进行检查。结果表明，当信噪比约3：1时，该检查方法最小检测限为6.5ng。
2.5 耐用性试验
取本品适量，按检查方法色谱条件，分别变动条件为波长±5nm，流速±0.2ml/min，柱温±5℃及不同色谱柱，考察各变动条件下有关物质检查结果变化情况。
结果表明：有关物质检查结果均无明显变化，该有关物质检查方法耐用性良好。
2.6 有关物质检查
取本品，按“2.1”、“2.2”项下方法制备溶液并进行检查。
3 讨论
综上所述，本检查方法是检查醋酸奥曲肽注射液的一个准确、可靠、操作性强的方法，对于该品种的杂质控制及产品稳定性研究有一定的参考意义。
参考文献
[1]吴琼珠，戴永健，刘卫卫.高效液相色谱法测定奥曲肽注射液的含量[J].中国生化药物杂志，2002，23（3）：144-145.
[2]李军依等.反相高效液相色潽法测定奥沙利铂含量及相关杂质[J].医药导报，2008.5（27）：597-598.
[3]高效液相色谱法.中国药典2010年版附录VD：29-31.
关键词：高效液相色谱法；奥曲肽；有关物质
奥曲肽是人工合成的八肽环状化合物，是生长抑素的类似物，其半衰期（1.5小时）比生长抑素长。其临床主要用于：（1）食道-胃静脉曲张出血。（2）预防胰腺术后并发症。（3）类癌综合征的类癌瘤。（4）经手术、放射治疗或多巴胺受体激动剂治疗失败的肢端肥大症等。本文根据拟定的奥曲肽注射液的反相高效液相色潽法（RP-HPLC）有关物质测定方法，进行了方法学研究，为奥曲肽注射液的进一步研究提供了可靠的分析方法及理论依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪；MS105型精密电子天平（梅特勒）；脱苏氨醇8奥曲肽对照品（2mg，批号140795-201001，中检所）；醋酸奥曲肽对照品（20mg，批号140730-201303，中检所）；醋酸奥曲肽注射液（1ml：0.2mg，自制，批号：20150101、20150102、20150103）；四甲基氢氧化铵、磷酸、乙腈均为色谱纯，水为注射用水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dikma C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水880ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（900：100）作为流动相A；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水380ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（400：600）作为流动相B；按下表进行梯度洗脱。
流速：1.0ml/min；柱温25℃；检测波长：210nm；进样量：20μl。取脱苏氨醇8奥曲肽与醋酸奥曲肽对照品适量，加水溶解并制成每1ml中各约含脱苏氨醇8奥曲肽10μg和醋酸奥曲肽0.1mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按奥曲肽峰计算不低于3000；脱苏氨醇8奥曲肽与奥曲肽峰的分离度应符合要求。
2.2 检查方法
取本品适量，加水稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，除去相对保留时间小与0.5的色谱峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（2.0%），各杂质峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（4.0%）。
2.3 专属性
照2.2 检查方法中供试品溶液配制方法，制得供试品溶液。另取本品处方制剂的空白辅料适量，按上述方法制备成空白辅料溶液。
酸破坏溶液：取本品适量，加入0.1mol/L盐酸溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成酸破坏溶液。同时不加本品制成空白酸破坏溶液。
碱破坏溶液：取本品适量，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L盐酸溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成碱破坏溶液。同时不加本品制成空白碱破坏溶液。
氧化破坏溶液：取本品适量，加入0.5%过氧化氢溶液1ml，室温放置30min后，按上述方法稀释制备成氧化破坏溶液。同时不加本品制成氧化破坏溶液。
高温破坏溶液：取本品，置于60℃条件加热120min后，按上述方法稀释制备成高温破坏溶液。
光照破坏溶液：取本品，置于4500±500lx光照条件下照射15天后，按上述方法稀释制备成光照破坏溶液。
取上述溶液及系统适用性溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果表明：本有关物质检查方法条件下，空白辅料溶液不干扰主峰及杂质峰的检出。能够有效检出各破坏性试验溶液中产生的降解产物。且降解产物峰均能与主成分峰达到基线分离。系统适用性溶液中，脱苏氨醇8奥曲肽与奥曲肽峰的分离度大于2.0，表明本方法对相关降解产物及已知杂质检查的专属性较好。
2.4 最小检测限考察
取本品适量，加水进行梯度稀释，按检查方法色谱条件进行检查。结果表明，当信噪比约3：1时，该检查方法最小检测限为6.5ng。
2.5 耐用性试验
取本品适量，按检查方法色谱条件，分别变动条件为波长±5nm，流速±0.2ml/min，柱温±5℃及不同色谱柱，考察各变动条件下有关物质检查结果变化情况。
结果表明：有关物质检查结果均无明显变化，该有关物质检查方法耐用性良好。
2.6 有关物质检查
取本品，按“2.1”、“2.2”项下方法制备溶液并进行检查。
3 讨论
综上所述，本检查方法是检查醋酸奥曲肽注射液的一个准确、可靠、操作性强的方法，对于该品种的杂质控制及产品稳定性研究有一定的参考意义。
参考文献
[1]吴琼珠，戴永健，刘卫卫.高效液相色谱法测定奥曲肽注射液的含量[J].中国生化药物杂志，2002，23（3）：144-145.
[2]李军依等.反相高效液相色潽法测定奥沙利铂含量及相关杂质[J].医药导报，2008.5（27）：597-598.
[3]高效液相色谱法.中国药典2010年版附录VD：29-31.