人黑皮素4受体F261S突变基因的克隆和功能验证

• 作 者: 邵新宇 贾伟平 蔡姝冰 方启晨 张蓉 陆俊茜 项坤三
• 机 构: 苏州大学附属第一医院内分泌科,200233,上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所,200233,上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所,200233,上海
• 出 处: 中华医学杂志
• 发表日期: 2005年85期
• 关键词: 克隆 分子 肥胖症 突变 黑皮素4受体

目的 研究黑皮素4受体(MC4R)基因的新突变F261S是否造成了MC4R蛋白功能改变.方法用携带F261S纯合突变的先证者及正常人的基因组DNA,PCR扩增突变型及野生型MC4R基因全长,克隆到topo-TA真核表达质粒载体,测序鉴定后转染人胚肾293细胞.用浓度为1×10-11～1×10-5 mmol/L的α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)与表达的MC4R蛋白结合后,用双荧光素酶报告基因测试系统检测胞内cAMP,萤火虫荧光/海洋腔肠荧光二者强度之比体现了cAMP浓度.结果α-MSH浓度在1×10-9～1×10-8 mmol/L时野生型胞内双荧光强度比值显著高于突变型细胞(P<0.05),在1×10-7～1×10-5 mmol/L时差异更为显著(P<0.01).结论 F261S突变使MC4R介导的信号转导能力下降,此突变与中国人早发性肥胖有关。