【摘 要】
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为构建高质量的丹参c DNA文库以及通过酵母双杂交获得丹参Sm JAZ8互作蛋白基因。研究以丹参的根、茎、叶、花、毛状根为材料,利用SMART(switching mechanism at 5’end of RN
【机 构】
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西北农林科技大学生命科学学院; 西北农林科技大学理学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31670295);中央高校基本科研业务费专项基金项目(2452017159)
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为构建高质量的丹参c DNA文库以及通过酵母双杂交获得丹参Sm JAZ8互作蛋白基因。研究以丹参的根、茎、叶、花、毛状根为材料,利用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)方式合成全长c DNA,并结合基于双链的特异性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)均一化技术,构建丹参的均一化全长c DNA文库。通过文库鉴定,检测到c DNA文库库容为1.45×106,重组率为100%,插入片段平均大小为500~2 000 bp。构建p DEST-p GADT7-Sm JAZ8重组载体,将该载体转化Y2HGold菌种,通过酵母双杂交进行互作蛋白的筛选,最终筛选到了丹参Dna J蛋白和UBQ蛋白。该研究既成功构建了丹参均一化全长c DNA文库,又为后续丹参功能基因筛选和基因功能的研究奠定了基础。
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