人sTNFR1基因的克隆、融合表达与生物学活性

• 作 者: 傅蕾 彭仕芳 谭德明 刘洪波
• 机 构: 中南大学湘雅医院感染病科
• 出 处: 中国生物工程杂志
• 发表日期: 2007年7期
• 关键词: 人sTNFR1 克隆 原核表达 免疫活性 生物学活性 Human sTNFR1 Clone Prokaryotic expression Immunine ac
• 基金项目: 湖南省自然科学基金资助项目（05JJ30178）

采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致。经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP。结果显示：经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性;MTT检测目的蛋白可有效地封闭TNFα对QSG7701的细胞毒性作用;流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QS