【摘 要】
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目的 通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法 的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法 提供
【机 构】
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呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院),广州医学院第一附属医院,广州,510120;澳门科技大学中医药学院,澳门特别行政区
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目的 通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法 的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法 提供参考.方法 以腺病毒感染的A549细胞为样品,分别以蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸,核酸经紫外分光光度计检测A260/A280的比值后,用荧光定量PCR方法 检测核酸中腺病毒拷贝数浓度,并记录四种腺病毒核酸提取方法 所需的操作时间.结果 蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸的A260/A280的比值依次为1.85532、1.7377、1.81474和1.43934,核酸中腺病毒拷贝数浓度依次为4.9×105 copies/mL、3.94×103 copies/mL、2.66×10 copies/mL和6.15×106 copies/mL,提取核酸所需的时间分别为1.5、15、0.5和0.5 h.结论 四种腺病毒核酸提取方法 中,蛋白酶K法简单快捷、成本低廉,适合一般实验室使用;苯酚法适合用于提取细胞培养上清中病毒的核酸;病毒DNA/RNA试剂盒的优点是操作时间短,得到的病毒核酸纯度较高;腺病毒荧光PCR检测试剂盒对病毒的核酸损耗少,操作步骤少,适用于临床标本的腺病毒核酸检测.
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