【摘 要】
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目的 探讨RNA干扰自噬相关基因14(ATG14)对肝癌细胞自噬的影响及其促进索拉菲尼诱导细胞凋亡的机制.方法 ATG14 siRNA和siRNA NC转染肝癌Huh7细胞,分别设为ATG14 siRNA组和siRNA NC组,正常培养肝癌细胞为空白对照组.实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测3组细胞ATG14 mRNA表达情况;MTT法检测肝癌细胞增殖活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测ATG14、LC3、p62、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白表达情况;免疫荧光检测L
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院肿瘤内科,辽宁 沈阳 110000
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目的 探讨RNA干扰自噬相关基因14(ATG14)对肝癌细胞自噬的影响及其促进索拉菲尼诱导细胞凋亡的机制.方法 ATG14 siRNA和siRNA NC转染肝癌Huh7细胞,分别设为ATG14 siRNA组和siRNA NC组,正常培养肝癌细胞为空白对照组.实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测3组细胞ATG14 mRNA表达情况;MTT法检测肝癌细胞增殖活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测ATG14、LC3、p62、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白表达情况;免疫荧光检测LC3荧光点表达情况.结果 ATG14 siRNA组ATG14 mRNA相对表达量为0.47±0.19,低于空白对照组(1.07±0.09)和siRNA NC组(1.16±0.13),F=382.137,P<0.001.ATG14 siRNA组ATG14蛋白相对表达量为0.38±0.19,低于空白对照组(1.23±0.09)和siRNA NC组(1.19±0.11),F=32.621,P<0.001.空白对照组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量为0.94±0.12,低于ATG14 siRNA组的1.48±0.15,t=15.851,P<0.001;ATG14 siRNA组p62蛋白相对表达量为0.78±0.07,低于空白对照组的0.98±0.09,t=21.362,P<0.001.免疫荧光实验结果显示,ATG14 siRNA组LC3荧光强度为15.42±4.26,低于对照组的46.42±5.73,t=41.247,P<0.001.索拉菲尼干预Huh7细胞24 h后,空白对照组和ATG14 siRNA组细胞半抑制浓度分别为(7.87±0.38)和(6.15±0.22)μmol/mL,差异有统计学意义,t=31.747,P<0.001.对照组、索拉菲尼组和索拉菲尼+ATG14 siRNA组早期凋亡率分别为(1.61±0.33)％、(31.77±8.92)％和(58.14±3.12)％,F=37.843,P<0.001;晚期凋亡率分别为(5.56±1.28)％、(12.17±5.19)％和(18.33±3.42)％,F=59.872,P<0.001.空白对照组、索拉菲尼组和索拉菲尼+ATG14 siRNA组Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.47±0.09、0.78±0.09和1.37±0.51,F=81.731,P<0.001;Caspase-9蛋白相对表达量分别为0.71±0.11、1.23±0.24和1.41±0.19,F=93.891,P<0.001;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.82±0.19、0.39±0.19和0.21±0.09,F=57.424,P<0.001.结论 ATG14 siRNA能够抑制肝癌细胞自噬,并通过抑制自噬提高索拉菲尼对肝癌细胞的诱导凋亡作用.
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