【摘 要】
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目的 通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能. 方法 根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化
【机 构】
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厦门大学生命科学学院,福建厦门,361102
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目的 通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能. 方法 根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化树分析;制备Ac-ALMP多抗血清,对广州管圆线虫L1,感染期L3和成虫进行免疫组织定位,通过Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析. 结果 获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全基因序列,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease).进化树分析Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性较高.免疫荧光定位分析Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道).定量分析显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量较高,L3次之. 结论 成功对Ac-ALMP蛋白进行了原核及真核表达,定量分析Ac ALMP在虫体的肠道、角质层、精巢、体壁等均有分布,推测Ac-ALMP在广州管圆线虫寄生过程中起重要作用,可为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考.
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