P450cam突变体蛋白表达、纯化与结晶的改进及其四突变体（F87L／Y96F／L244A／V247A）晶体结构

• 作 者: 刘斌斌 孙蕾 徐峰 娄智勇 庞海 L.L.WONG
• 机 构: 清华大学结构生物学实验室,DepartmentofChemistryInorganicChemistryLaboratoryUniversityofOxfordU.k
• 出 处: 生物化学与生物物理进展
• 发表日期: 2004年7期
• 关键词: P450cam 四突变体 纯化 双波长检测 晶体结构 P450cam four mutants purification double UV check cry

在P450cam突变体蛋白纯化过程中使用280 nm/392 nm双波长比值检测蛋白质纯度,采用β-巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护,有效地缩短了纯化进程,纯化效率相应提高.以PEG 8000为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的P450cam四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)晶体,在Mar-Research面探测器系统上收集了0.22 nm分辨率的X射线衍射数据.采用同晶差值傅立叶法解析结构,最后的晶体学R因子和Rfree分别为0.197和0.247,键长偏差为0.001 77 n