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[中图分类号]R969.3[文献标识码]A[文章编号]1008-0465（2013）-06-0389-03
[摘要]目的观察倒卵叶五加茎总苷、总皂苷、总黄酮等有效部位对血小板聚集率的影响。方法采用比浊法测定倒卵叶五加提取物在ADP聚集诱导剂作用下血小板聚集率。结果倒卵叶五加提取物对血小板聚集抑制率，总苷IC50为299.3μg；总皂苷IC50为267μg；总黄酮的IC50为276μg。结论倒卵叶五加茎总苷、总黄酮、总皂苷均具有较强的对抗血小板聚集的作用。
[关键词]倒卵叶五加；总黄酮；总皂苷；总苷；抗血小板聚集
倒卵叶五加（Acanthopanax obovatus Hoo）为五加科五加属刺五加组植物。近年来我们对其茎进行了深入地研究，倒卵叶五加茎主要含有黄酮、皂苷、苷类、多糖等成分[1]。有文献报道倒卵叶五加总皂苷对动物神经系统、呼吸系统和心血管系统有显著的作用[2]。本实验通过对倒卵叶五加茎总苷、总皂苷、总黄酮对血小板聚集率的影响实验，阐明倒卵叶五加治疗心脑血管病变的作用机制。
1仪器与材料
1.1动物家兔10只，体重1.9～2.5kg，雌雄不拘。由西安交通大学医学院实验动物中心提供。
1.2药品与试剂ADP（杭州美亚药业有限公司生产，批号090412）；磷酸氢二钠 、磷酸二氢钠（青州鑫胜化工有限公司生产，批号080924）；枸橼酸钠（西安韦伯力扬化工有限责任公司生产，批号081125）；硅油（东莞市弘亚有机硅有限公司生产，批号080224）；倒卵叶五加皂苷样品（60%）、总苷样品（73%）、黄酮样品（70%），陕西中药研究所制剂室提供。
1.3试剂配制
1.3.1ADP溶液精密称取34.5mgADP，用PBS溶液溶解后移入100ml容量瓶中，用PBS溶液定容即得345μg·mL-1的ADP溶液。
1.3.2PBS缓冲溶液精密称取磷酸二氢钠0.593g，磷酸氢二钠5.803 g，用蒸馏水溶解，移入100mL容量瓶中定容即得0.2mol·L-1磷酸缓冲溶液。
1.3.32mL·100mL-1硅油—石油醚溶液精密量取20mL硅油溶于乙醚中，加至1000mL即得。
1.3.4抗凝剂精密称取3.8 g枸橼酸钠用PBS溶液溶解后移入100mL容量瓶中，用PBS溶液定容即得3.8g·100mL-1枸橼酸钠溶液。
1.3.5样品溶液取50mg样品，用少量PBS溶液溶解后移入5mL定量瓶中，定容，制得10mg·mL-1的样品溶液备用。测定时不同的浓度按比例稀释。
1.4试管硅化将试管容器仔细清洗，用蒸馏水冲洗三遍，自然干燥，放入2mL·100mL-1硅油—石油醚溶液中浸泡30min后，取出，自然干燥，备用。
1.5仪器LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪，北京世帝科技仪器公司生产。
2测定方法
血小板聚集率测定方法采用比浊法[3]，按血小板聚集凝血因子分析仪使用说明书方法进行测定。家兔颈总动脉取血，按（1：9）的比例加于盛有抗凝剂的硅化玻璃管，混匀，800r/min离心10min，取出，抽出上清液，作为富血小板的血浆PRP备用；另将上述离心后的沉淀再次放入离心机，3000r/min，离心10min，取出，抽取上清液，作为贫血小板的血浆PPP备用。按仪器说明书，用贫血小板PPP进行仪器标定，测定孔内，经PPP标定后，将盛有200μl富血小板PRP及1小磁珠的测试杯置于血小板聚集仪中，分别加入倒卵叶五加总黄酮 、总苷、总皂苷的PBS溶液，37℃温育1min，在搅拌情况下加入聚集诱导剂ADP溶液20μl，记录5min血小板聚集曲线，计算倒卵叶五加总黄酮 、总苷、总皂苷的血小板聚集抑制率及IC50。聚集抑制率按以下公式计算：血小板聚集抑制率（%）= ×100%
IC50为血小板聚集抑制率为50% 所需要的样品提取物，IC50 越小，说明样品对血小板聚集的抑制能力越强。
3统计学方法
用SPSS16.0统计软件对数据进行统计分析，实验结果以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。
5讨论
通过抗血小板聚集试验，表明倒卵叶五含有抑制血小板聚集的活性组份，其茎总苷、总黄酮、总皂苷均显示了较强的抗血小板聚集的药理活性，揭示了倒卵叶五有防止血栓及动脉粥样硬化形成的可能性。有效部位的提取和抗血小板聚集作用是对倒卵叶五的现有用途和作用的拓展，倒卵叶五茎总苷、总黄酮、总皂苷IC50接近，若从生产成本及工业化生产来说，取总苷作为有效部位更合理。
参考文献
[1]秦永刚，曹爱兰，李青，等.紫外分光光度法对倒卵叶五加药材的定量评价研究[J]. 医学信息，2002，15（8）：22-24
[2]马世玉，明章银，闵清，等.倒卵叶五加总皂苷抗心肌缺血再灌注心律失常的作用[J].2001，（3）：16-18
[3]陈奇，孙建宁，林志彬，等.中药药理研究方法学第2版[M].北京：人民卫生出版社，2006：570
[摘要]目的观察倒卵叶五加茎总苷、总皂苷、总黄酮等有效部位对血小板聚集率的影响。方法采用比浊法测定倒卵叶五加提取物在ADP聚集诱导剂作用下血小板聚集率。结果倒卵叶五加提取物对血小板聚集抑制率，总苷IC50为299.3μg；总皂苷IC50为267μg；总黄酮的IC50为276μg。结论倒卵叶五加茎总苷、总黄酮、总皂苷均具有较强的对抗血小板聚集的作用。
[关键词]倒卵叶五加；总黄酮；总皂苷；总苷；抗血小板聚集
倒卵叶五加（Acanthopanax obovatus Hoo）为五加科五加属刺五加组植物。近年来我们对其茎进行了深入地研究，倒卵叶五加茎主要含有黄酮、皂苷、苷类、多糖等成分[1]。有文献报道倒卵叶五加总皂苷对动物神经系统、呼吸系统和心血管系统有显著的作用[2]。本实验通过对倒卵叶五加茎总苷、总皂苷、总黄酮对血小板聚集率的影响实验，阐明倒卵叶五加治疗心脑血管病变的作用机制。
1仪器与材料
1.1动物家兔10只，体重1.9～2.5kg，雌雄不拘。由西安交通大学医学院实验动物中心提供。
1.2药品与试剂ADP（杭州美亚药业有限公司生产，批号090412）；磷酸氢二钠 、磷酸二氢钠（青州鑫胜化工有限公司生产，批号080924）；枸橼酸钠（西安韦伯力扬化工有限责任公司生产，批号081125）；硅油（东莞市弘亚有机硅有限公司生产，批号080224）；倒卵叶五加皂苷样品（60%）、总苷样品（73%）、黄酮样品（70%），陕西中药研究所制剂室提供。
1.3试剂配制
1.3.1ADP溶液精密称取34.5mgADP，用PBS溶液溶解后移入100ml容量瓶中，用PBS溶液定容即得345μg·mL-1的ADP溶液。
1.3.2PBS缓冲溶液精密称取磷酸二氢钠0.593g，磷酸氢二钠5.803 g，用蒸馏水溶解，移入100mL容量瓶中定容即得0.2mol·L-1磷酸缓冲溶液。
1.3.32mL·100mL-1硅油—石油醚溶液精密量取20mL硅油溶于乙醚中，加至1000mL即得。
1.3.4抗凝剂精密称取3.8 g枸橼酸钠用PBS溶液溶解后移入100mL容量瓶中，用PBS溶液定容即得3.8g·100mL-1枸橼酸钠溶液。
1.3.5样品溶液取50mg样品，用少量PBS溶液溶解后移入5mL定量瓶中，定容，制得10mg·mL-1的样品溶液备用。测定时不同的浓度按比例稀释。
1.4试管硅化将试管容器仔细清洗，用蒸馏水冲洗三遍，自然干燥，放入2mL·100mL-1硅油—石油醚溶液中浸泡30min后，取出，自然干燥，备用。
1.5仪器LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪，北京世帝科技仪器公司生产。
2测定方法
血小板聚集率测定方法采用比浊法[3]，按血小板聚集凝血因子分析仪使用说明书方法进行测定。家兔颈总动脉取血，按（1：9）的比例加于盛有抗凝剂的硅化玻璃管，混匀，800r/min离心10min，取出，抽出上清液，作为富血小板的血浆PRP备用；另将上述离心后的沉淀再次放入离心机，3000r/min，离心10min，取出，抽取上清液，作为贫血小板的血浆PPP备用。按仪器说明书，用贫血小板PPP进行仪器标定，测定孔内，经PPP标定后，将盛有200μl富血小板PRP及1小磁珠的测试杯置于血小板聚集仪中，分别加入倒卵叶五加总黄酮 、总苷、总皂苷的PBS溶液，37℃温育1min，在搅拌情况下加入聚集诱导剂ADP溶液20μl，记录5min血小板聚集曲线，计算倒卵叶五加总黄酮 、总苷、总皂苷的血小板聚集抑制率及IC50。聚集抑制率按以下公式计算：血小板聚集抑制率（%）= ×100%
IC50为血小板聚集抑制率为50% 所需要的样品提取物，IC50 越小，说明样品对血小板聚集的抑制能力越强。
3统计学方法
用SPSS16.0统计软件对数据进行统计分析，实验结果以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。
5讨论
通过抗血小板聚集试验，表明倒卵叶五含有抑制血小板聚集的活性组份，其茎总苷、总黄酮、总皂苷均显示了较强的抗血小板聚集的药理活性，揭示了倒卵叶五有防止血栓及动脉粥样硬化形成的可能性。有效部位的提取和抗血小板聚集作用是对倒卵叶五的现有用途和作用的拓展，倒卵叶五茎总苷、总黄酮、总皂苷IC50接近，若从生产成本及工业化生产来说，取总苷作为有效部位更合理。
参考文献
[1]秦永刚，曹爱兰，李青，等.紫外分光光度法对倒卵叶五加药材的定量评价研究[J]. 医学信息，2002，15（8）：22-24
[2]马世玉，明章银，闵清，等.倒卵叶五加总皂苷抗心肌缺血再灌注心律失常的作用[J].2001，（3）：16-18
[3]陈奇，孙建宁，林志彬，等.中药药理研究方法学第2版[M].北京：人民卫生出版社，2006：570